內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑的反應(yīng)受pH的干擾。在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，要調(diào)節(jié)被測(cè)溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內(nèi)（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內(nèi))。用于調(diào)節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無(wú)熱原容器中儲(chǔ)存；必須對(duì)試液或溶液進(jìn)行驗(yàn)證，以證明不含可檢出的內(nèi)毒素并且無(wú)干擾因素。調(diào)節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應(yīng)該超過(guò)供試品的1092。如果超過(guò)10%，則在進(jìn)行計(jì)算時(shí)，將DH試劑的添加量的系數(shù)計(jì)算進(jìn)去。 凝膠法鱟試劑通過(guò)觀察凝膠形成定性內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)便，適合**器械內(nèi)毒素檢測(cè)初篩。上海非動(dòng)物源內(nèi)毒素檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)充分證明，內(nèi)毒素檢測(cè)重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測(cè)結(jié)果具有高度等效性，可實(shí)現(xiàn)方法無(wú)縫切換。對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測(cè)顯示，rCR 的檢測(cè)平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標(biāo)回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內(nèi)精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規(guī)對(duì)精密度的要求。這種等效性確保了實(shí)驗(yàn)室在切換至重組試劑時(shí)，歷史數(shù)據(jù)和工藝控制標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)性，降低方法轉(zhuǎn)換風(fēng)險(xiǎn)。 江蘇生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)LER現(xiàn)象細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中，rCR 加標(biāo)回收率穩(wěn)定在 50%-200% 藥典范圍，可準(zhǔn)確完成檢測(cè)。

內(nèi)毒素檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方案需遵循“標(biāo)曲可靠性驗(yàn)證（靈敏度復(fù)核）-稀釋倍數(shù)計(jì)算-干擾試驗(yàn)”的完整流程，以保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確合規(guī)。首先進(jìn)行標(biāo)曲可靠性試驗(yàn)，用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備至少3個(gè)濃度的稀釋液（相鄰濃度間稀釋倍數(shù)不超過(guò)10，下限濃度不低于鱟試劑標(biāo)示檢測(cè)限），每濃度設(shè) 3 支平行管，同時(shí)做2支陰性對(duì)照；當(dāng)陰性對(duì)照的吸光度小于或透光率大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的檢測(cè)值或反應(yīng)時(shí)間大于標(biāo)準(zhǔn)曲線下限的反應(yīng)時(shí)間，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，相關(guān)系數(shù)r的幅值≥0.980時(shí)試驗(yàn)方有效，否則需重新操作。接著按公式 L=K/M 確定樣本內(nèi)毒素限值，K 值依給藥途徑而定，M結(jié)合人均60kg體重、1.62m? 體表面積及上限給藥劑量計(jì)算，也可參考藥典行標(biāo)。隨后明確有效稀釋上限倍數(shù)（MVD），即供試品允許稀釋的上限倍數(shù)，確保在此范圍內(nèi)檢測(cè)限值。再開(kāi)展樣本干擾試驗(yàn)，制備供試品溶液（A）、供試品加標(biāo)溶液（B，加標(biāo)濃度為標(biāo)曲中點(diǎn)）、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液（C）及陰性對(duì)照（D），按公式 R=(Cs-Ct)/λm×**計(jì)算加標(biāo)回收率，50%-200%為合格；若鱟試劑、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)，保障內(nèi)毒素檢測(cè)的可靠性。

在為新物料或新產(chǎn)品、中間產(chǎn)品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法時(shí)，常會(huì)遇到各種困難，尤其是尚處于新藥研發(fā)早期階段的藥物。此時(shí)，由于藥物制劑、緩沖系統(tǒng)等還不穩(wěn)定，經(jīng)常會(huì)發(fā)生變化，這樣就給方法的建立帶來(lái)了不同程度的影響。在建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法之前，須盡可能多地了解有關(guān)該藥品的基本信息，例如：有關(guān)樣品的可溶性信息、推薦的稀釋液、在水中的溶解度以及合適溶劑，樣品的pH范圍，分子量大小；如果是蛋白產(chǎn)品，還要了解該產(chǎn)品的等電點(diǎn)，產(chǎn)品規(guī)格、體積或重量，擬用于臨床的用法和用量等，以便選擇合適的樣品處理方法和內(nèi)毒素檢測(cè)方法。 動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑監(jiān)測(cè)吸光度變化定量?jī)?nèi)毒素，抗干擾強(qiáng)，適配復(fù)雜基質(zhì)樣品檢測(cè)。

隨著動(dòng)物保護(hù)理念和法規(guī)要求升級(jí)，重組因子C法（rFC法）作為 LAL 法的替代技術(shù)逐漸普及。重組 C 因子是以基因重組的方式表達(dá)的 LAL 試劑中的 C 因子，C 因子被內(nèi)毒素活化后切割熒光底物產(chǎn)生游離熒光基團(tuán)，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)可以反應(yīng)活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出內(nèi)毒素的含量。與傳統(tǒng) LAL 法相比，rFC 法無(wú)需依賴鱟血資源，避免了天然 LAL 試劑批間差異大、易受 β- 葡聚糖干擾等問(wèn)題，且反應(yīng)特異性更強(qiáng)。目前，《美國(guó)藥典》、《歐洲藥典》等法規(guī)已收錄 rFC 法，歐盟更推薦其用于疫苗等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品檢測(cè)，在保證檢測(cè)準(zhǔn)確性的同時(shí)，符合動(dòng)物福利和可持續(xù)發(fā)展要求。 湖州申科凝膠法鱟試劑符合藥典要求，配抗增液抑制非特異性反應(yīng)，多靈敏度可選。上海**器械內(nèi)毒素檢測(cè)合規(guī)申報(bào)

內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）稀釋液配制時(shí)渦旋很重要，可使內(nèi)毒素充分溶解，保證濃度準(zhǔn)確。上海非動(dòng)物源內(nèi)毒素檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

低內(nèi)毒素回收（LER）又稱內(nèi)毒素掩蔽，是指無(wú)菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無(wú)法通過(guò)稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測(cè)干擾。LER 會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機(jī)構(gòu)重點(diǎn)關(guān)注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報(bào)時(shí)提交 LER 研究報(bào)告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國(guó)藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內(nèi)容，與國(guó)際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)流程，避免因 LER 導(dǎo)致的檢測(cè)偏差，確保藥品**。 上海非動(dòng)物源內(nèi)毒素檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估